簡要描述：外泌體等細胞外囊泡（EV: Extracellular Vesicle）不僅參與排放生物體內的廢棄物，同時也是細胞間的通信媒介。根據分泌的細胞不同，EV的特性及其內含物（核酸、蛋白質、脂質等）也有所差異，目前正在嘗試將參與疾病的細胞來源EV及其內含物作為生物標記應用于“液體活檢"，即通過體液樣品診斷疾病。
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外泌體等細胞外囊泡（EV: Extracellular Vesicle）不僅參與排放生物體內的廢棄物，同時也是細胞間的通信媒介。根據分泌的細胞不同，EV的特性及其內含物（核酸、蛋白質、脂質等）也有所差異，目前正在嘗試將參與疾病的細胞來源EV及其內含物作為生物標記應用于“液體活檢"，即通過體液樣品診斷疾病。
為實現液體活檢的開發和應用，需要從大量的樣品中高效地分離和純化EV。但超速離心法等傳統方法單次可處理的樣品數有限，從多個樣品中分離和純化EV需要花費龐大的人力和物力。
因此，FUJIFILM Wako開發了EV分離純化用試劑盒MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS，適用于提取核酸和蛋白質的自動提取設備（如Thermo Fisher Scientific公司的KingFisher™ Flex等）。本試劑盒采用與金澤大學的華山教授共同開發的EV分離純化技術“PS親和法"1），配合自動提取設備，可同時分離和純化高純度且低損傷EV的樣品上限為96份。
◆產品概要
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS是使用PS親和法分離和純化細胞外囊泡（EV）的試劑盒，適用于自動提取設備（如Thermo Fisher Scientific公司的KingFisher™ Flex等）。由于可從多達96份樣品中分離和純化EV，因此也適用于利用EV進行生物標記的探索和高通量篩選 (High-throughput screening，HTS) 。
特點 ● 配合自動提取設備，同時可分離和純化EV的樣品上限為96份 ● 使用自行研發的分離純化技術“PS親和法"，可分離高純度且低損傷 的EV。 | 適用樣品（示例） ● 細胞培養上清 ● 血清 ● 血漿 ● 尿液 ● 唾液 |
適用自動提取設備（分離成果經FUJIFILM Wako驗證的設備）
● KingFisher™ Flex（Thermo Fisher Scientific等）
與手動款試劑盒（MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2）的區別
比較本試劑盒與手動分離純化試劑盒（MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2, 產品編號：290-84103），兩者的區別如下表所示。另，EV的回收效率基本持平。（參考“性能數據"）
自動提取 （MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS） | 手動提取 （MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2） | |
Tim4和磁珠的結合方法 | 直接與磁珠結合 | 通過sheng物素-親和素系統與磁珠結合 |
洗脫緩沖液中的表面活性劑濃度 | 高 （抑制了磁珠的損耗） | 低 |
洗脫緩沖液中的EDTA濃度 | 高 （減少了洗脫步驟的次數） | 低 |
◆原理
PS親和法是FUJIFILM Wako研發的EV分離方法，使用了與存在于EV表面的磷脂酰si氨酸（PS）特異性結合的Tim4。
通過PS-Tim4結合的高特異性和螯合劑，可在完整狀態下溫和地洗脫高純度EV。
特異性結合
| 洗脫
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◆實驗方案
使用KingFisher™ Flex分離純化EV（進行從親和反應到洗脫一系列過程時）
※將親和反應和洗脫步驟作為單獨的程序分別進行，并使用新的tip comb進行洗脫，可能可以減少樣品中的雜質。更多信息請參閱使用說明書。
實驗方案的詳細內容和設置示例請查閱使用說明書。
◆數據
與手動試劑盒（MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2）比較的性能數據
通過NTA，比較分離的粒子數
使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (Auto，自動提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (Manual，手動提取)，從血清、肝素血漿、尿液、細胞培養上清（COLO201）中分離和純化EV。通過Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)確認EV的粒子數
【結果】
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手動試劑盒獲得了相同程度的粒子數。
通過ELISA，比較分離的粒子數
使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (自動提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (手動提取)，從血清、肝素血漿、尿液、細胞培養上清（COLO201）中分離和純化EV。然后使用PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Streptavidin HRP) （產品編號：298-80601）確認EV的回收率。
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【結果】
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手動試劑盒獲得了相同程度的回收率。
通過蛋白質組學分析，比較分離的蛋白質種類、蛋白量
使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (自動提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (手動提取)方法對200 μL人血清分離和純化EV。蛋白質組學分析回收的EV溶液。
（1）鑒定的蛋白質種類
【結果】
在4次實驗中，MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS與手動試劑盒相比，鑒定的蛋白質數量始終更多、再現性更高。
（2）EV標記蛋白質的量
【結果】
分別使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手動試劑盒進行分離的EV中所含的EV標記蛋白質之間并無顯著差異，自動化對EV的回收率沒有影響。
（3）非EV標記的量（以白蛋白為例）
【結果】
與手動試劑盒相比，使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS純化分離的非EV標記物白蛋白量更少，表明可回收雜質更少的EV。
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| 產品編號 | 產品名稱 | 產品規格 | 產品等級 | 備注 |
| 293-96401 | MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS HTS用MagCapture™ EV提取試劑盒PS | 96 tests | 基因研究用 | - |
| 產品編號 | 產品名稱 | 產品規格 | 產品等級 | 備注 |
| 294-84101 | MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 MagCapture™ 外泌體提取試劑盒PS Ver.2 | 2 tests | 基因研究用 | - |
| 290-84103 | MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 MagCapture™ 外泌體提取試劑盒PS Ver.2 | 10 tests | 基因研究用 | - |
| 適用于從10 mL以下的細胞培養上清以及體液樣品中分離和純化EV |
| 產品編號 | 產品名稱 | 產品規格 | 產品等級 | 備注 |
| 131-19491 | MassivEV™ EV Purification Column PS MassivEV™ 細胞外囊泡（EV）純化分離柱 PS | 1 mL | 基因研究用 | - |
| 137-19493 | MassivEV™ EV Purification Column PS MassivEV™ 細胞外囊泡（EV）純化分離柱 PS | 5 mL | 基因研究用 | - |
| 295-96601 | MassivEV™ Purification Buffer Set MassivEV™ 細胞外囊泡（EV）純化緩沖液套裝 | 1mL×10回用 (5mL×2回用) | 基因研究用 | - |
| 適用于從10 mL至公升級別規模的細胞培養上清中分離和純化EV |
| 產品編號 | 產品名稱 | 產品規格 | 產品等級 | 備注 |
| 058-09261 | EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent EV-Save™ 細胞外囊泡保存穩定劑（超濾用） | 1 mL | 基因研究用 | - |
| 050-09461 | EV-Sav™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent for in vivo EV-Save™ 細胞外囊泡保存穩定劑（動物體內實驗用) | 1 mL | 基因研究用 | - |
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